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Rreal-time PCR Detection Kit para diarreia epidêmica suína, gastroenterite transmissível, vírus da doença do deltacoronavírus suíno e rotavírus suíno
[Nome do Produto] Kit de detecção de PCR em tempo real para diarreia epidêmica suína, gastroenterite transmissível, vírus da doença do deltacoronavírus suíno e rotavírus suíno
[Pacote] 50 testes
[Indicação] O Kit de Detecção de PCR em Tempo Real para Diarréia Epidêmica Suína, Gastroenterite Transmissível, Vírus da Doença Deltacoronavírus Suíno e Rotavírus é aplicável para detecção, tipagem, diagnóstico auxiliar e investigação epidemiológica de PED/TGEV/PDCoV/RV em soro suíno, plasma, tecido intestinal , conteúdo intestinal, gânglios linfáticos mesentéricos, excreções e outras amostras.Os resultados do teste são apenas para fins de pesquisa e não para diagnóstico clínico.
[Principais componentes e conteúdo]
Nome | Especificação | Quantidade |
Solução de reação PED/TGEV/PDCoV/RV | 1000µl/Tubo | 1 |
PED/TGEV/PDCoV/RV Controle Positivo | 250µl/Tubo | 1 |
Controle negativo | 250µl/Tubo | 1 |
[Armazenamento e Prazo de Validade]
Armazenado a -20±5℃, congelamento e descongelamento repetidos ≤ 3 vezes, o prazo de validade é de 12 meses.
[Modelo]
Para ABI QuantStudio 5、CFX Opus 96、LightCycler480、Gentier 96E/96R、LineGene 9600 Plus e outros termocicladores.
[Método de teste]
1. Extração de Ácido Nucleico
Um kit de extração de DNA/RNA comercializado pode ser realizado para extração de ácido nucleico, siga as instruções do kit.
2. amplificação por PCR
2.1 Calcule o número de amostras de teste, pegue n+2 tubos de reação de PCR e adicione 20µl a de solução de reação para cada tubo.
2.2 Adicionar 5µl ácido nucleico do controle negativo, controle positivo e amostras nos tubos de reação PRC acima, respectivamente, centrifugar a 8000 rpm por vários segundos e colocá-los no termociclador.
2.3 As condições de reação são definidas da seguinte forma:
Parâmetros relevantes do amplificador | |||
Sistema | Volume total: 30µl | ||
Coleta de sinais | Sinal de fluorescência quadrivalente PED/TGEV/PDCoV/RV | Gastroenterite transmissível (TGEV) - canal HEX coleta sinal de fluorescência | |
Diarréia Epidêmica Suína (PED) - canal FAM coleta sinal de fluorescência | |||
Vírus da doença do deltacoronavírus suíno (PDCoV) - canal Cy5 coleta sinal de fluorescência | |||
Rotavírus suíno (RV) - canal ROX coleta sinal de fluorescência | |||
condições de reação de PCR | Estágio | Condition | número do ciclo |
Transcrição reversa | 55 ℃: 15 minutos | 1 | |
Pré-degeneração | 95 ℃: 30 segundos | 1 | |
PCR | 95 ℃: 10 segundos |
40 | |
60 ℃: 30 segundos (Defina para coletar o sinal fluorescente no final desta etapa) |
[Interpretação dos resultados]
1. Determinação da eficácia do kit de teste:
(1) Controle positivo: valor Ct dos canais FAM, HEX, Cy5 e ROX ≤ 32, curva de amplificação com fase exponencial óbvia.
(2) Controle negativo: os canais FAM, HEX, Cy5 e ROX não possuem curva de amplificação ou a curva de amplificação é reta ou ligeiramente oblíqua.
2. Determinação dos resultados:
Julgamento do resultado | canal FAM | canal HEX | canal Cy5 | canal ROX |
TGEV ácido positivo | - | + | - | - |
PED ácido nucleico positivo | + | - | - | - |
PDCoV ácido nucleico positivo | - | - | + | - |
RV ácido nucleico positivo | - | - | - | + |
TGEV e PED ácido nucleico positivo | + | + | - | - |
TGEV e PDCoV ácido nucleico positivo | - | + | + | - |
PED e PDCoV ácido nucleico positivo | + | - | + | - |
TGEV e ácido nucleico RV positivo | - | + | - | + |
PED e RV ácido nucleico positivo | + | - | - | + |
PDCoV e ácido nucleico RV positivo | - | - | + | + |
TGEV, PED e ácido nucleico RV positivo | + | + | - | + |
TGEV, PDCoV e ácido nucleico RV positivo | + | - | + | + |
PED, PDCoV e ácido nucleico RV positivo | - | + | + | + |
TGEV, PED e PDCoV ácido nucleico positivo | + | + | + | - |
TGEV, PED, PDCoV e ácido nucleico RV positivo | + | + | + | + |
TGEV, PED, PDCoV e RV ácido nucleico negativo | - | - | - | - |
*Observação:
Se houver uma curva de amplificação de crescimento exponencial e valor Ct ≤ 36, é determinado como '+'.
Se não houver curva de amplificação, ela é determinada como '-'.
Se 36 < Valor Ct < 40, é um amostra duvidosa, e a análise deve ser repetida para confirmação.
[Precauções]
1. A gestão do laboratório deve seguir rigorosamente as especificações de gestão do laboratório de amplificação de genes por PCR.O pessoal do laboratório deve ser treinado profissionalmente.O processo experimental deve ser conduzido rigorosamente em diferentes áreas (área de preparação de reagentes, área de preparação de amostras, área de amplificação e análise de produtos).Todos os consumíveis devem ser descartáveis após a esterilização.Aparelhos, equipamentos e suprimentos especiais em cada estágio da operação do experimento não devem ser usados de forma cruzada.
2. Prepare a cabine de segurança biológica para o estágio de preparação de reagentes e amostras.O jaleco, luvas descartáveis e pipeta devem ser realizados durante o experimento.
3. O congelamento e descongelamento repetidos de reagentes devem ser evitados tanto quanto possível.Antes do uso, os reagentes devem ser completamente descongelados e centrifugados a 8000rpm por alguns segundos.
4. Por favor, coloque a pipeta usada na área de preparação da amostra no recipiente contendo desinfetante e descarte com o lixo após a esterilização.
5. Após o experimento, a mesa de trabalho e a pipeta devem ser tratadas com hipoclorito 10% ou álcool 75% ou lâmpada ultravioleta.
[Fabricação]
Nome: Shandong Xinda Gene Technology Co., Ltd
Uma subsidiária da Shandong Sinder Technology Co., Ltd
Endereço: Edifício B2, Parque Industrial de Bandaohuigu, Estrada Shungeng, Cidade Zhucheng, Província de Shandong
Código Postal: 262233
Telefone: +86 - 0532 5882 0810
Rreal-time PCR Detection Kit para diarreia epidêmica suína, gastroenterite transmissível, vírus da doença do deltacoronavírus suíno e rotavírus suíno
[Nome do Produto] Kit de detecção de PCR em tempo real para diarreia epidêmica suína, gastroenterite transmissível, vírus da doença do deltacoronavírus suíno e rotavírus suíno
[Pacote] 50 testes
[Indicação] O Kit de Detecção de PCR em Tempo Real para Diarréia Epidêmica Suína, Gastroenterite Transmissível, Vírus da Doença Deltacoronavírus Suíno e Rotavírus é aplicável para detecção, tipagem, diagnóstico auxiliar e investigação epidemiológica de PED/TGEV/PDCoV/RV em soro suíno, plasma, tecido intestinal , conteúdo intestinal, gânglios linfáticos mesentéricos, excreções e outras amostras.Os resultados do teste são apenas para fins de pesquisa e não para diagnóstico clínico.
[Principais componentes e conteúdo]
Nome | Especificação | Quantidade |
Solução de reação PED/TGEV/PDCoV/RV | 1000µl/Tubo | 1 |
PED/TGEV/PDCoV/RV Controle Positivo | 250µl/Tubo | 1 |
Controle negativo | 250µl/Tubo | 1 |
[Armazenamento e Prazo de Validade]
Armazenado a -20±5℃, congelamento e descongelamento repetidos ≤ 3 vezes, o prazo de validade é de 12 meses.
[Modelo]
Para ABI QuantStudio 5、CFX Opus 96、LightCycler480、Gentier 96E/96R、LineGene 9600 Plus e outros termocicladores.
[Método de teste]
1. Extração de Ácido Nucleico
Um kit de extração de DNA/RNA comercializado pode ser realizado para extração de ácido nucleico, siga as instruções do kit.
2. amplificação por PCR
2.1 Calcule o número de amostras de teste, pegue n+2 tubos de reação de PCR e adicione 20µl a de solução de reação para cada tubo.
2.2 Adicionar 5µl ácido nucleico do controle negativo, controle positivo e amostras nos tubos de reação PRC acima, respectivamente, centrifugar a 8000 rpm por vários segundos e colocá-los no termociclador.
2.3 As condições de reação são definidas da seguinte forma:
Parâmetros relevantes do amplificador | |||
Sistema | Volume total: 30µl | ||
Coleta de sinais | Sinal de fluorescência quadrivalente PED/TGEV/PDCoV/RV | Gastroenterite transmissível (TGEV) - canal HEX coleta sinal de fluorescência | |
Diarréia Epidêmica Suína (PED) - canal FAM coleta sinal de fluorescência | |||
Vírus da doença do deltacoronavírus suíno (PDCoV) - canal Cy5 coleta sinal de fluorescência | |||
Rotavírus suíno (RV) - canal ROX coleta sinal de fluorescência | |||
condições de reação de PCR | Estágio | Condition | número do ciclo |
Transcrição reversa | 55 ℃: 15 minutos | 1 | |
Pré-degeneração | 95 ℃: 30 segundos | 1 | |
PCR | 95 ℃: 10 segundos |
40 | |
60 ℃: 30 segundos (Defina para coletar o sinal fluorescente no final desta etapa) |
[Interpretação dos resultados]
1. Determinação da eficácia do kit de teste:
(1) Controle positivo: valor Ct dos canais FAM, HEX, Cy5 e ROX ≤ 32, curva de amplificação com fase exponencial óbvia.
(2) Controle negativo: os canais FAM, HEX, Cy5 e ROX não possuem curva de amplificação ou a curva de amplificação é reta ou ligeiramente oblíqua.
2. Determinação dos resultados:
Julgamento do resultado | canal FAM | canal HEX | canal Cy5 | canal ROX |
TGEV ácido positivo | - | + | - | - |
PED ácido nucleico positivo | + | - | - | - |
PDCoV ácido nucleico positivo | - | - | + | - |
RV ácido nucleico positivo | - | - | - | + |
TGEV e PED ácido nucleico positivo | + | + | - | - |
TGEV e PDCoV ácido nucleico positivo | - | + | + | - |
PED e PDCoV ácido nucleico positivo | + | - | + | - |
TGEV e ácido nucleico RV positivo | - | + | - | + |
PED e RV ácido nucleico positivo | + | - | - | + |
PDCoV e ácido nucleico RV positivo | - | - | + | + |
TGEV, PED e ácido nucleico RV positivo | + | + | - | + |
TGEV, PDCoV e ácido nucleico RV positivo | + | - | + | + |
PED, PDCoV e ácido nucleico RV positivo | - | + | + | + |
TGEV, PED e PDCoV ácido nucleico positivo | + | + | + | - |
TGEV, PED, PDCoV e ácido nucleico RV positivo | + | + | + | + |
TGEV, PED, PDCoV e RV ácido nucleico negativo | - | - | - | - |
*Observação:
Se houver uma curva de amplificação de crescimento exponencial e valor Ct ≤ 36, é determinado como '+'.
Se não houver curva de amplificação, ela é determinada como '-'.
Se 36 < Valor Ct < 40, é um amostra duvidosa, e a análise deve ser repetida para confirmação.
[Precauções]
1. A gestão do laboratório deve seguir rigorosamente as especificações de gestão do laboratório de amplificação de genes por PCR.O pessoal do laboratório deve ser treinado profissionalmente.O processo experimental deve ser conduzido rigorosamente em diferentes áreas (área de preparação de reagentes, área de preparação de amostras, área de amplificação e análise de produtos).Todos os consumíveis devem ser descartáveis após a esterilização.Aparelhos, equipamentos e suprimentos especiais em cada estágio da operação do experimento não devem ser usados de forma cruzada.
2. Prepare a cabine de segurança biológica para o estágio de preparação de reagentes e amostras.O jaleco, luvas descartáveis e pipeta devem ser realizados durante o experimento.
3. O congelamento e descongelamento repetidos de reagentes devem ser evitados tanto quanto possível.Antes do uso, os reagentes devem ser completamente descongelados e centrifugados a 8000rpm por alguns segundos.
4. Por favor, coloque a pipeta usada na área de preparação da amostra no recipiente contendo desinfetante e descarte com o lixo após a esterilização.
5. Após o experimento, a mesa de trabalho e a pipeta devem ser tratadas com hipoclorito 10% ou álcool 75% ou lâmpada ultravioleta.
[Fabricação]
Nome: Shandong Xinda Gene Technology Co., Ltd
Uma subsidiária da Shandong Sinder Technology Co., Ltd
Endereço: Edifício B2, Parque Industrial de Bandaohuigu, Estrada Shungeng, Cidade Zhucheng, Província de Shandong
Código Postal: 262233
Telefone: +86 - 0532 5882 0810