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Kit de Detecção de PCR em Tempo Real para Vírus da Peste Suína Africana (MGF/CD2V/VP72)
【Nome do Produto】
Kit de Detecção de PCR em Tempo Real para Vírus da Peste Suína Africana (MGF/CD2V/VP72)
【Pacote】
50 kits/caixa
【Principais componentes e conteúdo】
Nome | Especificação | Quantidade |
Solução de reação ASFV (MGF/CD2V/VP72) | 1000µl/Tubo | 1 |
ASFV (MGF/CD2V/VP72) Controle Positivo | 250µl/Tubo | 1 |
Controle negativo | 250µl/Tubo | 1 |
【Armazenamento e prazo de validade】
Armazenado a -20±5℃
,Congelamento e descongelamento repetidos ≤ 3 vezes, o prazo de validade é de 12 meses.
【Método de teste】
1. Extração de Ácido Nucleico
O kit de extração de DNA comercializado pode ser realizado para extração de ácido nucleico, siga as instruções do kit.
2. Amplificação por PCR
2.1 Calcule o número de amostras de teste, pegue n+2 tubos de reação de PCR e adicione 20 µl de solução de reação a cada tubo.
2.2 Adicionar 5µl l ácido nucleico de controle negativo, controle positivo e amostras nos tubos de reação de PCR acima, respectivamente, centrifugar a 8000 rpm por vários segundos e colocá-los no amplificador de PCR quantitativo fluorescente.
2.3 As condições de reação são definidas da seguinte forma:
Parâmetros relevantes do amplificador | |||
Sistema | Volume total: 30µl | ||
Coleta de sinais
| ASFV (MGF/CD2V/VP72) Sinal fluorescente
| O canal VP72-FAM coleta sinal de fluorescência | |
O canal CD2V-VIC/HEX coleta sinal de fluorescência | |||
O canal MGF-CY5 coleta o sinal de fluorescência | |||
condições de reação de PCR
| Estágio | Condition | número do ciclo |
processamento UNG | 37 ℃: 2 minutos | 1 | |
Pré-degeneração | 95 ℃: 30 segundos | 1 | |
PCR
| 95 ℃: 10 segundos |
40
| |
56 ℃: 30 segundos (Defina para coletar o sinal fluorescente no final deste estágio) |
【Interpretação dos resultados】
1. Determinação da eficácia do kit de teste:
(1) Controle positivo: valor Ct dos canais FAM, HEX/VIC e CY5 ≤ 32, curva de amplificação com fase exponencial óbvia.
(2) Controle negativo: os canais FAM, HEX/VIC e CY5 não têm curva de amplificação, ou a curva de amplificação é reta ou levemente oblíqua, sem fase exponencial significativa e valor de Ct ≥ 38 ou nenhum valor de Ct.
2. Determinação dos resultados:
Julgamento do resultado | canal FAM | canal HEX/VIC | canal CY5 |
VP72 ASFV ácido nucleico positivo | + | - | - |
CD2V ASFV ácido nucleico positivo | - | + | - |
Ácido nucleico MGF ASFV positivo | - | - | + |
VP72 e CD2V ASFV ácido nucleico positivo | + | + | - |
VP72 e MGF ASFV ácido nucleico positivo | + | - | + |
CD2V e MGF ASFV ácido nucleico positivo | - | + | + |
MGF, CD2V e VP72 ASFV ácido nucleico positivo | + | + | + |
MGF, CD2V e VP72 ASFV ácido nucleico negativo | - | - | - |
*Observação:
(1) Se houver uma curva logarítmica de amplificação da fase de crescimento e valor de Ct ≤ 35, ela é julgada como +.Se não houver curva de amplificação ou valor de Ct > 38, é julgado como -.As amostras são suspeitas quando 35 < valor Ct <38, que deve ser testado novamente.Se o valor de Ct do resultado retestado ainda estiver entre 35-38 com fase de crescimento logarítmico óbvio, ele é considerado positivo, caso contrário, negativo.
【Precauções】
1. A gestão do laboratório deve estar em estrita conformidade com as especificações de gestão do laboratório de amplificação de genes por PCR.O pessoal do laboratório deve ser treinado profissionalmente.O processo experimental deve ser conduzido estritamente em diferentes áreas (área de preparação de reagentes, área de preparação de amostras, área de amplificação e área de análise de produtos).Todos os consumíveis devem ser descartáveis após a esterilização.Aparelhos, equipamentos e suprimentos especiais em cada estágio da operação do experimento não devem ser usados de forma cruzada.
2. Prepare a cabine de segurança biológica para o estágio de preparação de reagentes e amostras.O jaleco, luvas descartáveis e pipetador devem ser realizados durante o experimento.
3. O congelamento e descongelamento repetidos de reagentes devem ser evitados tanto quanto possível.Antes do uso, os reagentes devem ser completamente descongelados e centrifugados a 8000rpm por alguns segundos.
4. Por favor, coloque a pipeta usada na área de preparação da amostra no recipiente contendo desinfetante e descarte com o lixo após a esterilização.
5. Após o experimento, a mesa de trabalho e a pipeta foram tratadas com hipoclorito 10% ou álcool 75% ou lâmpada ultravioleta.
【Fabricação】
Nome: Shandong Xinda Gene Technology Co., Ltd
Uma subsidiária da Shandong Sinder Technology Co., Ltd
Endereço: Edifício B2, Parque Industrial Bandaohuigu, Estrada Shungeng, Cidade Zhucheng, Província de Shandong
Código Postal: 262233
Telefone: +86 - 0532 5882 0810
Kit de Detecção de PCR em Tempo Real para Vírus da Peste Suína Africana (MGF/CD2V/VP72)
【Nome do Produto】
Kit de Detecção de PCR em Tempo Real para Vírus da Peste Suína Africana (MGF/CD2V/VP72)
【Pacote】
50 kits/caixa
【Principais componentes e conteúdo】
Nome | Especificação | Quantidade |
Solução de reação ASFV (MGF/CD2V/VP72) | 1000µl/Tubo | 1 |
ASFV (MGF/CD2V/VP72) Controle Positivo | 250µl/Tubo | 1 |
Controle negativo | 250µl/Tubo | 1 |
【Armazenamento e prazo de validade】
Armazenado a -20±5℃
,Congelamento e descongelamento repetidos ≤ 3 vezes, o prazo de validade é de 12 meses.
【Método de teste】
1. Extração de Ácido Nucleico
O kit de extração de DNA comercializado pode ser realizado para extração de ácido nucleico, siga as instruções do kit.
2. Amplificação por PCR
2.1 Calcule o número de amostras de teste, pegue n+2 tubos de reação de PCR e adicione 20 µl de solução de reação a cada tubo.
2.2 Adicionar 5µl l ácido nucleico de controle negativo, controle positivo e amostras nos tubos de reação de PCR acima, respectivamente, centrifugar a 8000 rpm por vários segundos e colocá-los no amplificador de PCR quantitativo fluorescente.
2.3 As condições de reação são definidas da seguinte forma:
Parâmetros relevantes do amplificador | |||
Sistema | Volume total: 30µl | ||
Coleta de sinais
| ASFV (MGF/CD2V/VP72) Sinal fluorescente
| O canal VP72-FAM coleta sinal de fluorescência | |
O canal CD2V-VIC/HEX coleta sinal de fluorescência | |||
O canal MGF-CY5 coleta o sinal de fluorescência | |||
condições de reação de PCR
| Estágio | Condition | número do ciclo |
processamento UNG | 37 ℃: 2 minutos | 1 | |
Pré-degeneração | 95 ℃: 30 segundos | 1 | |
PCR
| 95 ℃: 10 segundos |
40
| |
56 ℃: 30 segundos (Defina para coletar o sinal fluorescente no final deste estágio) |
【Interpretação dos resultados】
1. Determinação da eficácia do kit de teste:
(1) Controle positivo: valor Ct dos canais FAM, HEX/VIC e CY5 ≤ 32, curva de amplificação com fase exponencial óbvia.
(2) Controle negativo: os canais FAM, HEX/VIC e CY5 não têm curva de amplificação, ou a curva de amplificação é reta ou levemente oblíqua, sem fase exponencial significativa e valor de Ct ≥ 38 ou nenhum valor de Ct.
2. Determinação dos resultados:
Julgamento do resultado | canal FAM | canal HEX/VIC | canal CY5 |
VP72 ASFV ácido nucleico positivo | + | - | - |
CD2V ASFV ácido nucleico positivo | - | + | - |
Ácido nucleico MGF ASFV positivo | - | - | + |
VP72 e CD2V ASFV ácido nucleico positivo | + | + | - |
VP72 e MGF ASFV ácido nucleico positivo | + | - | + |
CD2V e MGF ASFV ácido nucleico positivo | - | + | + |
MGF, CD2V e VP72 ASFV ácido nucleico positivo | + | + | + |
MGF, CD2V e VP72 ASFV ácido nucleico negativo | - | - | - |
*Observação:
(1) Se houver uma curva logarítmica de amplificação da fase de crescimento e valor de Ct ≤ 35, ela é julgada como +.Se não houver curva de amplificação ou valor de Ct > 38, é julgado como -.As amostras são suspeitas quando 35 < valor Ct <38, que deve ser testado novamente.Se o valor de Ct do resultado retestado ainda estiver entre 35-38 com fase de crescimento logarítmico óbvio, ele é considerado positivo, caso contrário, negativo.
【Precauções】
1. A gestão do laboratório deve estar em estrita conformidade com as especificações de gestão do laboratório de amplificação de genes por PCR.O pessoal do laboratório deve ser treinado profissionalmente.O processo experimental deve ser conduzido estritamente em diferentes áreas (área de preparação de reagentes, área de preparação de amostras, área de amplificação e área de análise de produtos).Todos os consumíveis devem ser descartáveis após a esterilização.Aparelhos, equipamentos e suprimentos especiais em cada estágio da operação do experimento não devem ser usados de forma cruzada.
2. Prepare a cabine de segurança biológica para o estágio de preparação de reagentes e amostras.O jaleco, luvas descartáveis e pipetador devem ser realizados durante o experimento.
3. O congelamento e descongelamento repetidos de reagentes devem ser evitados tanto quanto possível.Antes do uso, os reagentes devem ser completamente descongelados e centrifugados a 8000rpm por alguns segundos.
4. Por favor, coloque a pipeta usada na área de preparação da amostra no recipiente contendo desinfetante e descarte com o lixo após a esterilização.
5. Após o experimento, a mesa de trabalho e a pipeta foram tratadas com hipoclorito 10% ou álcool 75% ou lâmpada ultravioleta.
【Fabricação】
Nome: Shandong Xinda Gene Technology Co., Ltd
Uma subsidiária da Shandong Sinder Technology Co., Ltd
Endereço: Edifício B2, Parque Industrial Bandaohuigu, Estrada Shungeng, Cidade Zhucheng, Província de Shandong
Código Postal: 262233
Telefone: +86 - 0532 5882 0810