Status de disponibilidade: | |
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Kit de detecção para vírus da gripe aviária H5/H7/H9/subtipo geral de RNA (sondagem de fluorescência de PCR)
【Nome do Produto】
Kit de detecção de PCR em tempo real para vírus da gripe aviária H5/H7/H9/subtipo geral
【Pacote】
50 kits/caixa
【Principais componentes e conteúdo】
Nome | Especificação | Quantidade |
H5/H7/H9/Solução de Reação Trivalente Geral | 1250µl/Tubo | 1 |
H5/H7/H9/Controle Positivo Geral | 250µl/Tubo | 1 |
Controle negativo | 250µl/Tubo | 1 |
【Armazenamento e prazo de validade】
Armazenado a -20±5℃, congelamento e descongelamento repetidos ≤ 3 vezes, o prazo de validade é de 12 meses.
【Modelo】
ABI 7500, ABI QuantStudio 5, CFX Connect, CFX Opus 96, LightCycler480, Gentiter 96E/96R, LineGene 9600 Plus e outros amplificadores PCR quantitativos fluorescentes.
【Método de teste】
1. Extração de Ácido Nucleico
O kit de extração de RNA comercializado pode ser realizado para extração de ácido nucleico, siga as instruções do kit.
2. Amplificação por PCR
2.1 Calcule o número de amostras de teste, pegue n+2 tubos de reação de PCR e adicione 25 µl de solução de reação a cada tubo.
2.2 Adicionar 5µl ácido nucleico de controle negativo, controle positivo e amostras nos tubos de reação de PCR acima, respectivamente, centrifugar a 8000 rpm por vários segundos e colocá-los no amplificador de PCR quantitativo fluorescente.
2.3 As condições de reação são definidas da seguinte forma:
Parâmetros relevantes do amplificador | |||
Sistema | Volume total: 30µl | ||
Coleta de sinais
| Gripe Aviária H5/H7/H9/Geral
| Subtipo H5 - canal HEX coleta sinal de fluorescência | |
Subtipo H7 - canal FAM coleta sinal de fluorescência | |||
Subtipo H9 - o canal Cy5 coleta o sinal de fluorescência | |||
Geral - o canal ROX coleta o sinal de fluorescência | |||
condições de reação de PCR
| Estágio | Condition | número do ciclo |
Transcrição reversa | 55 ℃: 15 minutos | 1 | |
Pré-degeneração | 95 ℃: 30 segundos | 1 | |
PCR
| 95 ℃: 10 segundos |
40
| |
56 ℃: 30 segundos (Defina para coletar o sinal fluorescente no final deste estágio) |
【Interpretação dos resultados】
1. Determinação da eficácia do kit de teste:
(1) Controle positivo fraco: valor Ct dos canais FAM, HEX,Cy5 e ROX ≤ 32, curva de amplificação com fase exponencial óbvia.
(2) Controle em branco: os canais FAM, HEX, Cy5 e ROX não têm curva de amplificação, ou a curva de amplificação é reta ou levemente oblíqua, sem fase exponencial significativa e valor de Ct ≥ 38 ou nenhum valor de Ct.
2. Determinação dos resultados:
Julgamento do resultado | canal FAM | canal HEX | canal Cy5 | canal ROX |
Vírus da gripe aviária subtipo H5 ácido nucleico positivo | - | + | - | + |
Vírus da gripe aviária subtipo H7 ácido nucleico positivo | + | - | - | + |
Vírus da gripe aviária subtipo H9 ácido nucleico positivo | - | - | + | + |
Vírus da influenza aviária H5/H7 subtipo ácido nucleico positivo | + | + | - | + |
Vírus da influenza aviária H5/H9 subtipo ácido nucleico positivo | - | + | + | + |
Vírus da influenza aviária H7/H9 subtipo ácido nucleico positivo | + | - | + | + |
Vírus da influenza aviária H5/H7/H9 subtipo ácido nucleico positivo | + | + | + | + |
Ácido nucleico do vírus da gripe aviária de baixa patogenicidade positivo | - | - | - | + |
Ácido nucléico do vírus da influenza aviária negativo | - | - | - | - |
*Observação:
(1) Se houver uma curva logarítmica de amplificação da fase de crescimento e valor de Ct ≤ 36, ela é julgada como +.Se não houver curva de amplificação ou valor de Ct > 36, é julgado como -.As amostras são suspeitas quando 36 < valor Ct <40, que deve ser testado novamente.
(2) Se o resultado de qualquer subtipo H5/H7/H9 for + com canal ROX -, ele deverá ser testado novamente.
【Precauções】
1. A gestão do laboratório deve estar em estrita conformidade com as especificações de gestão do laboratório de amplificação de genes por PCR.O pessoal do laboratório deve ser treinado profissionalmente.O processo experimental deve ser conduzido rigorosamente em diferentes áreas (área de preparação de reagentes, área de preparação de amostras, área de amplificação e análise de produtos).Todos os consumíveis devem ser descartáveis após a esterilização.Aparelhos, equipamentos e suprimentos especiais em cada estágio da operação do experimento não devem ser usados de forma cruzada.
2. Por favor, prepare a cabine de segurança biológica para o estágio de preparação de reagentes e amostras.O jaleco, luvas descartáveis e pipetador devem ser realizados durante o experimento.
3. O congelamento e descongelamento repetidos de reagentes devem ser evitados tanto quanto possível.Antes do uso, os reagentes devem ser completamente descongelados e centrifugados a 8000rpm por alguns segundos.
4. Por favor, coloque a pipeta usada na área de preparação da amostra no recipiente contendo desinfetante e descarte com o lixo após a esterilização.
5. Após o experimento, a mesa de trabalho e o pipetador foram tratados com hipoclorito 10% ou álcool 75% ou lâmpada ultravioleta.
【Fabricação】
Nome: Shandong Xinda Gene Technology Co., Ltd
Uma subsidiária da Shandong Sinder Technology Co., Ltd
Endereço: Edifício B2, Parque Industrial de Bandaohuigu, Estrada Shungeng, Cidade Zhucheng, Província de Shandong
Código Postal: 262233
Telefone: +86 - 0532 5882 0810
Kit de detecção para vírus da gripe aviária H5/H7/H9/subtipo geral de RNA (sondagem de fluorescência de PCR)
【Nome do Produto】
Kit de detecção de PCR em tempo real para vírus da gripe aviária H5/H7/H9/subtipo geral
【Pacote】
50 kits/caixa
【Principais componentes e conteúdo】
Nome | Especificação | Quantidade |
H5/H7/H9/Solução de Reação Trivalente Geral | 1250µl/Tubo | 1 |
H5/H7/H9/Controle Positivo Geral | 250µl/Tubo | 1 |
Controle negativo | 250µl/Tubo | 1 |
【Armazenamento e prazo de validade】
Armazenado a -20±5℃, congelamento e descongelamento repetidos ≤ 3 vezes, o prazo de validade é de 12 meses.
【Modelo】
ABI 7500, ABI QuantStudio 5, CFX Connect, CFX Opus 96, LightCycler480, Gentiter 96E/96R, LineGene 9600 Plus e outros amplificadores PCR quantitativos fluorescentes.
【Método de teste】
1. Extração de Ácido Nucleico
O kit de extração de RNA comercializado pode ser realizado para extração de ácido nucleico, siga as instruções do kit.
2. Amplificação por PCR
2.1 Calcule o número de amostras de teste, pegue n+2 tubos de reação de PCR e adicione 25 µl de solução de reação a cada tubo.
2.2 Adicionar 5µl ácido nucleico de controle negativo, controle positivo e amostras nos tubos de reação de PCR acima, respectivamente, centrifugar a 8000 rpm por vários segundos e colocá-los no amplificador de PCR quantitativo fluorescente.
2.3 As condições de reação são definidas da seguinte forma:
Parâmetros relevantes do amplificador | |||
Sistema | Volume total: 30µl | ||
Coleta de sinais
| Gripe Aviária H5/H7/H9/Geral
| Subtipo H5 - canal HEX coleta sinal de fluorescência | |
Subtipo H7 - canal FAM coleta sinal de fluorescência | |||
Subtipo H9 - o canal Cy5 coleta o sinal de fluorescência | |||
Geral - o canal ROX coleta o sinal de fluorescência | |||
condições de reação de PCR
| Estágio | Condition | número do ciclo |
Transcrição reversa | 55 ℃: 15 minutos | 1 | |
Pré-degeneração | 95 ℃: 30 segundos | 1 | |
PCR
| 95 ℃: 10 segundos |
40
| |
56 ℃: 30 segundos (Defina para coletar o sinal fluorescente no final deste estágio) |
【Interpretação dos resultados】
1. Determinação da eficácia do kit de teste:
(1) Controle positivo fraco: valor Ct dos canais FAM, HEX,Cy5 e ROX ≤ 32, curva de amplificação com fase exponencial óbvia.
(2) Controle em branco: os canais FAM, HEX, Cy5 e ROX não têm curva de amplificação, ou a curva de amplificação é reta ou levemente oblíqua, sem fase exponencial significativa e valor de Ct ≥ 38 ou nenhum valor de Ct.
2. Determinação dos resultados:
Julgamento do resultado | canal FAM | canal HEX | canal Cy5 | canal ROX |
Vírus da gripe aviária subtipo H5 ácido nucleico positivo | - | + | - | + |
Vírus da gripe aviária subtipo H7 ácido nucleico positivo | + | - | - | + |
Vírus da gripe aviária subtipo H9 ácido nucleico positivo | - | - | + | + |
Vírus da influenza aviária H5/H7 subtipo ácido nucleico positivo | + | + | - | + |
Vírus da influenza aviária H5/H9 subtipo ácido nucleico positivo | - | + | + | + |
Vírus da influenza aviária H7/H9 subtipo ácido nucleico positivo | + | - | + | + |
Vírus da influenza aviária H5/H7/H9 subtipo ácido nucleico positivo | + | + | + | + |
Ácido nucleico do vírus da gripe aviária de baixa patogenicidade positivo | - | - | - | + |
Ácido nucléico do vírus da influenza aviária negativo | - | - | - | - |
*Observação:
(1) Se houver uma curva logarítmica de amplificação da fase de crescimento e valor de Ct ≤ 36, ela é julgada como +.Se não houver curva de amplificação ou valor de Ct > 36, é julgado como -.As amostras são suspeitas quando 36 < valor Ct <40, que deve ser testado novamente.
(2) Se o resultado de qualquer subtipo H5/H7/H9 for + com canal ROX -, ele deverá ser testado novamente.
【Precauções】
1. A gestão do laboratório deve estar em estrita conformidade com as especificações de gestão do laboratório de amplificação de genes por PCR.O pessoal do laboratório deve ser treinado profissionalmente.O processo experimental deve ser conduzido rigorosamente em diferentes áreas (área de preparação de reagentes, área de preparação de amostras, área de amplificação e análise de produtos).Todos os consumíveis devem ser descartáveis após a esterilização.Aparelhos, equipamentos e suprimentos especiais em cada estágio da operação do experimento não devem ser usados de forma cruzada.
2. Por favor, prepare a cabine de segurança biológica para o estágio de preparação de reagentes e amostras.O jaleco, luvas descartáveis e pipetador devem ser realizados durante o experimento.
3. O congelamento e descongelamento repetidos de reagentes devem ser evitados tanto quanto possível.Antes do uso, os reagentes devem ser completamente descongelados e centrifugados a 8000rpm por alguns segundos.
4. Por favor, coloque a pipeta usada na área de preparação da amostra no recipiente contendo desinfetante e descarte com o lixo após a esterilização.
5. Após o experimento, a mesa de trabalho e o pipetador foram tratados com hipoclorito 10% ou álcool 75% ou lâmpada ultravioleta.
【Fabricação】
Nome: Shandong Xinda Gene Technology Co., Ltd
Uma subsidiária da Shandong Sinder Technology Co., Ltd
Endereço: Edifício B2, Parque Industrial de Bandaohuigu, Estrada Shungeng, Cidade Zhucheng, Província de Shandong
Código Postal: 262233
Telefone: +86 - 0532 5882 0810